細(xì)菌的測(cè)定和計(jì)量方式有哪些？
對(duì)于生物氧化過(guò)程中的細(xì)菌，使用時(shí)需要知道菌液中所含的細(xì)菌數(shù)量。測(cè)定和計(jì)量細(xì)菌的數(shù)量一般有以下幾種方法：
(1)比濁法。其原理是因?yàn)榫w不透光，利用菌液所含細(xì)菌濃度不同，液體的渾濁度則不同，然后利用分光光度計(jì)測(cè)定菌液的光密度。用測(cè)得的光密度和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)比，即可得知菌液的密度。
(2)直接計(jì)數(shù)法。該方法是利用血球計(jì)數(shù)器(Hemocytometer)，直接在顯微鏡下觀(guān)察計(jì)數(shù)所取菌液樣品中的細(xì)菌數(shù)量。
(3)平皿計(jì)數(shù)法。該方法是將所要測(cè)定的菌液取出后，稀釋成一定的倍數(shù)，用固體培養(yǎng)基制成平板，然后在一定的溫度下進(jìn)行培養(yǎng)，使其長(zhǎng)成菌落(Colony formation unit，CFU)，計(jì)算出菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，則得到所測(cè)菌液的活菌濃度。
(4)液體稀釋法。該方法是將菌液按連續(xù)的10倍系列在培養(yǎng)基中稀釋成不同的濃度，然后進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)培養(yǎng)后，記錄每個(gè)稀釋度出現(xiàn)生長(zhǎng)的試管數(shù)，然后查最大可能數(shù)表(Most probable number，MPN，見(jiàn)有關(guān)微生物實(shí)驗(yàn)教材)，根據(jù)樣品的稀釋倍數(shù)就可計(jì)算出其中活菌的含量。
(5)細(xì)胞干重測(cè)定法。該方法是將菌液離心或過(guò)濾后，洗滌除去培養(yǎng)基成分后轉(zhuǎn)移到適的容器中，置100～105℃干燥箱烘干或低溫低壓干燥(60～80℃)至恒重后稱(chēng)重。一般細(xì)胞干重為細(xì)胞濕重的10％～20％，對(duì)于細(xì)菌，一個(gè)細(xì)胞重約10-12～10-13g。
目前，采用較多的微生物生長(zhǎng)測(cè)定方法是比濁法、直接計(jì)數(shù)法和液體稀釋法。以上均為直接計(jì)數(shù)方法。此外，也有采用蛋白質(zhì)分析方法來(lái)估測(cè)細(xì)菌的數(shù)量。
2011-01-22
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